[高血压医学论文] 作者:徐晓凤 朱炳良 朱亚平 EB病毒(Epstein-Barr Virus)为含包膜的双链DNA病毒,属人类疱疹病毒4型,已经证实EB病毒与低分化鼻咽癌及多种淋巴瘤密切相关。近年来通过检测胃癌组织细胞中EBV基因组发现EBV感染与胃癌的发生有关[1];然而,目前的研究尚不足以明确这种关系。作者于2005年对泰州地区162例胃粘膜标本进行EB病毒检测,以探讨本地区EBV感染与胃癌的相关性。
1 材料与方法
1.1 标本及来源 病例来源于医院胃镜检查者162例,男108例,女54例,平均年龄47.4岁。其中对照组94例,慢性浅表性胃炎64例、胃溃疡16例、慢性萎缩性胃炎14例;胃癌组68例,其中贲门胃体癌42例、胃角癌14例、胃窦癌12例;胃癌诊断均有病理学证实。不能及时检测标本置-20℃冷冻保存。
1.2 引物合成
参考文献[2]报道的序列设计引物,由上海××公司合成。引物Ⅰ5’—GTACTCATCACCGGGTCTC—3',引物Ⅱ5'—TTCGGGTTGGAACCTCCTTG—3',扩增的产物长度为269bp。
1.3 试剂和仪器
Tag DNA多聚酶,4种脱氧核苷酸(dATP,dCTP,dGTP,dTTP),蛋白酶K,DNA提取液,TAE缓冲液,琼脂糖,溴化乙锭,液体石蜡等;美国ABI-7000荧光分析仪。
1.4 核酸提取
取米粒大小的胃镜钳取活检组织1~2块,在1.5ml Eppendorf管中用足量生理盐水漂洗3次,加300μl裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.6,1%SDS,300μg/ml蛋白酶K),用研磨器研磨成匀浆,55℃孵育1h,按常规的酶/氯仿方法抽提蛋白[3],乙醇沉淀核酸,漂洗晾干,50μl TE缓冲液(pH8.0)溶解,取5μl作模板。EBV阳性对照由××公司提供。
1.5 PCR扩增
50μl反应体系中,含1×PCR……
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