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胃癌患者胃粘膜EB病毒检测及意义

[高血压医学论文]    

            作者:徐晓凤 朱炳良 朱亚平 

EB病毒(Epstein-Barr Virus)为含包膜的双链DNA病毒,属人类疱疹病毒4型,已经证实EB病毒与低分化鼻咽癌及多种淋巴瘤密切相关。近年来通过检测胃癌组织细胞中EBV基因组发现EBV感染与胃癌的发生有关[1];然而,目前的研究尚不足以明确这种关系。作者于2005年对泰州地区162例胃粘膜标本进行EB病毒检测,以探讨本地区EBV感染与胃癌的相关性。

  1  材料与方法

  1.1  标本及来源
 
  病例来源于医院胃镜检查者162例,男108例,女54例,平均年龄47.4岁。其中对照组94例,慢性浅表性胃炎64例、胃溃疡16例、慢性萎缩性胃炎14例;胃癌组68例,其中贲门胃体癌42例、胃角癌14例、胃窦癌12例;胃癌诊断均有病理学证实。不能及时检测标本置-20℃冷冻保存。

  1.2  引物合成 

  参考文献[2]报道的序列设计引物,由上海××公司合成。引物Ⅰ5’—GTACTCATCACCGGGTCTC—3',引物Ⅱ5'—TTCGGGTTGGAACCTCCTTG—3',扩增的产物长度为269bp。

  1.3  试剂和仪器 

  Tag DNA多聚酶,4种脱氧核苷酸(dATP,dCTP,dGTP,dTTP),蛋白酶K,DNA提取液,TAE缓冲液,琼脂糖,溴化乙锭,液体石蜡等;美国ABI-7000荧光分析仪。

  1.4  核酸提取 

  取米粒大小的胃镜钳取活检组织1~2块,在1.5ml Eppendorf管中用足量生理盐水漂洗3次,加300μl裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.6,1%SDS,300μg/ml蛋白酶K),用研磨器研磨成匀浆,55℃孵育1h,按常规的酶/氯仿方法抽提蛋白[3],乙醇沉淀核酸,漂洗晾干,50μl TE缓冲液(pH8.0)溶解,取5μl作模板。EBV阳性对照由××公司提供。

  1.5  PCR扩增 

  50μl反应体系中,含1×PCR……

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投稿人:7uy     最后编辑:fibg
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